Výběr správného UV gelového zobrazovacího systému pro jasné a reprodukovatelné výsledky

Pokud jsou pásy slabé, pozadí je vysoké nebo jsou snímky špatně exponované, může být i úspěšné elektroforézní testování obtížné interpretovat. Kvalita zobrazování je klíčovým faktorem pro ověření výsledků, získání vzorku, hlášení a pro experimenty s reprodukovatelnými výsledky pro laboratoře provádějící DNA, RNA nebo proteinové gely.

UV gelový zobrazovací systém se skládá z následujících komponent: řízené osvětlení, světlotěsná skříň, optické filtry, citlivá kamera a analytický software. Není tedy dostatečné porovnávat rozlišení kamery při rozhodování, jaký systém zvolit. Kupující musí zohlednit celý proces zobrazování, od excitace skvrn až po export dat.

Co je to tedy UV gel? Zobrazování Systém?

UV gelový zobrazovací systém je navržen pro vizualizaci a dokumentaci DNA, RNA nebo proteinových pásů po gelové elektroforéze. Kombinací UV osvětlení, vysoce citlivé kamery, optických filtrů a softwaru pro analýzu obrazu umožňuje systém uživatelům jasně zachytit gelové snímky a analyzovat polohu pásu, jas a velikost molekul. Běžně se používá při ověřování PCR, elektroforéze nukleových kyselin, analýze restrikčního trávení a rutinních molekulárních biologických experimentech.

Uzavřený zobrazovací systém umožní kontrolované zachycování, analýzu, označování, ukládání a export, což není možné jednoduchým UV prohlížecím boxem. The Gelový zobrazovací systém (GI-200) od Longlight kombinuje všechny tyto vlastnosti v jednom stolním zobrazovacím systému pro každodenní laboratorní zobrazování.

Proč záleží na kompatibilitě osvětlení a barvení jsou důležité

Dobrý UV zdroj nemusí být nutně nejlepší pro vytvoření kvalitního obrazu. Excitační vlnová délka by měla odpovídat zvolené barvě a měl by být použit optický filtr, který propouští vyzařovanou fluorescenci. Tento nesoulad může vést k tlumeným pásmům, vysokému pozadí nebo falešným rozdílům mezi pruhy.

302 nm UV se běžně používá pro mnoho konvenčních nukleových kyselinových barv, zatímco jiné vlnové délky nebo modré světlo mohou být vhodnější v závislosti na barvivu a následné aplikaci. Je důležité, aby laboratoře potvrdily kompatibilitu barvidla a nepoužívaly jednu vlnovou délku pro každý test. Longlight průvodce výběrem UV transiluminátoru vás informuje o vlnové délce, jednotnosti osvětlení a oblasti pozorování a o tom, jak ovlivňují výsledky.

Assess Camera jako Dokončeno Zobrazovací řetězec

Megapixely se používají k indikaci rozměrů obrazu, ale nejsou to pouze ukazatele výkonu. Schopnost zaznamenat slabé a silné pásma ve stejném obrazu závisí na citlivosti senzoru a poměru signálu k šumu, stejně jako na kvalitě čočky a volbě filtrů, dynamickém rozsahu a jednotnosti osvětlení.

Pokud je prováděno rutinní PCR testování, může být dostačující jasné pásmové oddělení. Pro vzorky s nízkým množstvím a polokvantitativními porovnáními je vyžadován nižší šum a větší dynamický rozsah. Uživatelé by měli požádat o zobrazení fotografií pořízených uživatelem s jejich typem gelu a barvení, místo aby se spoléhali na rozlišovací list.

Ochrana DNA během Zobrazovací a gelová excize

Nukleové kyseliny mohou být poškozeny UV expozicí, zejména pokud je gel stále vystaven UV záření během procesu řezání pásů. To může snížit účinnost klonování nebo ovlivnit citlivé následné aplikace. Proto by měly být expozice minimalizovány.

Flexibilitu laboratoře zajišťuje systém, který poskytuje dva režimy: UV a modré světlo. UV je vhodné pro známá barvení a běžnou dokumentaci, ale modré světlo může být vhodnější, pokud bude z gelu získána DNA, za předpokladu, že je použito barvivo kompatibilní s modrým světlem. Pro další podrobnosti viz Longlight's Vysokorozlišovací gelové zobrazování a UV-bezpečný gelový excizní průvodce.

Začněme z UV bezpečnosti nákupní požadavek

Oči a kůže mohou být poškozeny přímým nebo odraženým UV zářením. Uzavřená zobrazovací skříň s UV-blokujícími panely a dveřními zámky může snížit náhodné vystavení UV záření.

Laboratorní postupy nenahrazují bezpečnostní prvky. Uživatelé však musí mít odpovídající osobní ochranné prostředky, školení, varovné značky a zdokumentované provozní postupy. Správně navržené krytí však usnadní správné chování a sníží expozici během rutinního zobrazování.

Systém odpovídá Laboratoř Pracovní postup

Laboratoře by měly před nákupem stanovit požadovaný výsledek výsledného snímku. Možná výuková laboratoř potřebuje výsledky rychle vidět, nebo regulovaná či výzkumná laboratoř bude chtít opakovatelná nastavení získávání, uživatelské záznamy, poznámky a vyhledávatelné soubory.

Výhody pracovního postupu zahrnují automatickou expozici, automatické ostření, detekci žebříku, optimalizaci obrazu, automatické pojmenovávání souborů, přenos dat a auditní stopy. Zvažte Vícesvětelné elektroforézní zobrazování gelem pro multi-assay laboratoř, což také snižuje potřebu samostatných nástrojů.

Zkuste to s skutečné Vzorky!

Demonstrace by měla zahrnovat nejen "laboratorní" gel, ale také simulovat "normální" podmínky. Testovat slabé a silné pásy vedle sebe, porovnat stejné vzorkové pásy na různých částech pódia a porovnat automatické nastavení s ověřeným manuálním nastavením.

Zjistěte, zda systém detekuje slabá pásma bez nasycení silných pásem. Zvažte také jednotnost pozadí, konzistenci ostření, přesnost anotací, rychlost exportu a snadnost čištění. Tyto testy by měly lépe ukázat skutečný výkon než u spec sheet fotoaparátů.

Standardizace Zobrazování Po instalaci

I ten nejkompetentnější systém se bude lišit od uživatele k uživateli, pokud uživatelé upraví barvení, expozice, filtry a jakékoli další zpracování souborů bez dokumentace. Laboratoře by měly vyvíjet zobrazovací techniky specifické pro každou aplikaci a uchovávat ověřená nastavení, pokud je software poskytuje.

Doporučují se následující rutinní kontroly: zobrazovací plocha, výstup osvětlení, zaostření, filtry, kapacita skladování a bezpečnostní zámek. Je také užitečné zaznamenávat data údržby, protože to pomáhá rozlišit drift přístroje od změn v barvení nebo přípravě vzorku.

Pokud už jsi mají Systém, jaké jsou známky toho, že je čas pořídit nový?

Výměna může být oprávněná, pokud jsou často přehlíženy slabé pásy, je nerovnoměrné osvětlení, nastavení expozice nelze replikovat a/nebo chybí metadata obrazů pro usnadnění kontroly. Pokračující údržba a skutečnost, že starší platformy nemusí být tak odolné proti skvrnám jako nové, mohou také zvýšit celkové náklady na starší platformu.

K rozhodování by měly být použity opakované experimenty, čas operátora, bezpečnostní omezení a potřeby správy dat – NEJEN stáří zařízení. Laboratoře zvažující modernizaci mohou volej Longlight Diskutovat o jejich vzorcích, barvách, gelových formátech a požadavcích na dokumentaci.

Závěr

Kamera s nejvyšším rozlišením nemusí být nutně nejlepší UV gelový zobrazovací systém. Je to systém, který sladí světlo s chemií skvrn, zabraňuje nasycení pásem, chrání uživatele i vzorky a zanechává konzistentní záznamy.

Laboratoře mohou využít ukázku založenou na vzorku nebo přehled specifikací zaměřenou na pracovní postupy k výběru platformy, která poskytne spolehlivé výsledky mezi operátory a experimenty.

Často kladené otázky

Q1. Jaký je účel UV gelového zobrazovacího systému?

Po elektroforéze zachytí obarvenou DNA, RNA nebo proteinové gely. Vytvořené snímky jsou následně analyzovány, dokumentovány, porovnávány a exportovány.

Q2. Má smysl používat UV zobrazování pro získání DNA?

Lze ji použít, ale mělo by se snažit minimalizovat expozici, protože UV záření může poškodit DNA. Pro gelové excize a následné klonování je často lepší snímat v modrém světle pomocí kompatibilního barvení.

Q3. Proč jsou gelové pásky na zachyceném snímku slabé?

To může být způsobeno nízkou koncentrací vzorku, nesouladem mezi skvrnami a světlem, nevhodným filtrem, nesprávnou expozicí, starým světlem nebo vysokým pozadím. Celé optické nastavení by mělo být ověřeno před opakováním experimentu.

Q4. Čím více megapixelů má fotoaparát, tím lepší je obraz, že?

Vůbec ne, existuje několik dalších faktorů jako citlivost, šum, dynamický rozsah, kvalita použitých objektivů/filtrů a jednotnost osvětlení. Podívejte se na skutečné fotografie místo megapixelů.

Q5. Jaká je doporučená frekvence pro vyšetření zobrazovacího systému zobrazovacím systémem?

Rutinní kontroly by měly zahrnovat čistotu zobrazovacích povrchů, jednotnost osvětlení, zaostření, filtry, bezpečnostní zámky a konzistenci obrazu.