Domov / Výrobek / Aplikace proteinů / Podpora proteomiky / Služba kryoelektronové mikroskopie

Služba kryoelektronové mikroskopie

Kryogenní elektronová mikroskopie (cryo-EM) je špičková technika ve strukturální biologii, která umožňuje vědcům vizualizovat přesné detaily biologických makromolekul. Kryo-EM je založena na transmisní elektronové mikroskopii s téměř atomovým rozlišením. Rostoucí poptávka na trhu v mnoha biomedicínských aplikacích, např. vývoj léků, protilátek, vakcín a podobně.

Získejte zdarma nabídku

Hodnota Cryo-EM Strukturální řešení Jednorázový pracovní postup Důvěryhodné platformy proč nás vybrat

Výhody kryo-EM oproti rentgenové krystalografii

Přestože rentgenová difrakce stále dosahuje o něco vyššího rozlišení, kryo-EM vykazuje významné výhody:

Je potřeba minimální množství vzorku.
Není potřeba krystalizace.
Není potřeba synchrotronový zdroj rentgenového záření.
Zachování téměř domorodého stavu.
Hodnocení flexibility.
Vhodné pro částice, které je obtížně krystalizovat, jako jsou membránové proteiny nebo supramolekulární soubory (např. virus).
Heterogenita konformací může být vyřešena v jediném vzorku.
Nízká úroveň čistoty přijata.

Exponenciální růst počtu položek v EMDB:

Strukturální řešení

Hodnocení vhodnosti vzorku – negativní barvení

Před zapojením důležitých mikroskopických zdrojů do kryo-EM se negativní vyšetření barvení obvykle provádí při pokojové teplotě a nízkém napětí. Tento krok umožňuje posoudit vhodnost vzorku, včetně homogenity, agregace, morfologie částic, velikosti a rozložení, pomocí barvicího prostředku s vysokou elektronovou hustotou.

Negativní barvení slouží jako klíčový krok kontroly kvality k posouzení, zda je vzorek vhodný pro následné sběr kryo-EM dat.

Určování struktury s vysokým rozlišením – analýza jednotlivých částic (SPA)

Sběr dat pomocí kryo-EM obvykle generuje přibližně 10⁴ až 10⁶ individuálních dvourozměrných projekcí částic zachycených v různých orientacích. Tyto projekce jsou výpočetně sladěny a klasifikovány prostřednictvím pracovního postupu zpracování obrazu, aby se rekonstruovala trojrozměrná mapa hustoty s subnanometrickým nebo téměř atomárním rozlišením.

Následně je vytvořen, zdokonalen a ověřen atomový model v rámci rekonstruované hustotní mapy, který poskytuje strukturální poznatky o funkčních mechanismech biologické makromolekuly, kterou zajímáme.

In situ strukturální analýza – kryoelektronová tomografie (Cryo-ET)

Kryoelektronová tomografie umožňuje trojrozměrnou vizualizaci biologických struktur v jejich původním buněčném nebo virovém kontextu. Tento přístup je zvláště vhodný pro studium velkých makromolekulárních souborů, membránově asociovaných komplexů a mechanismů virové infekce, přičemž nabízí prostorové a organizační informace nepřístupné metodám jednotlivých částic.

Pracovní postup služeb

Konzultace projektu → podepsání NDA → potvrzení servisní smlouvy → přijet→í vzorku, kontrola kvality → negativní screening skvrn → sběr kryo-EM dat → zpracování dat → doručení zpráv.

Data a výstupy výsledků

Plná dostupnost dat je zajištěna po celý životní cyklus projektu. Dodané materiály zahrnují surové kryo-EM filmy s referenčními soubory zesílení, mezilehlé datové soubory v různých fázích zpracování, finální trojrozměrné mapy hustoty s rozlišením a metrikami kvality, modely atomových souřadnic tam, kde je to relevantní, a křížové validační zprávy, jako jsou hodnocení MolProbity.

Všechna data lze doručovat prostřednictvím přenosných úložných zařízení nebo bezpečných cloudových platforem.

Tři hlavní vybavení

Naše kryo-EM služby jsou podporovány přístupem k vysoce výkonným vědeckým výzkumným platformám vybaveným nejmodernějšími přístroji.

Dostupné systémy zahrnují Talos L120C G2, vstupní platforma pro transmisní elektronovou mikroskopii a kryo-EM screening; Ledovce 2, 200 kV pracovní kryo-EM systém optimalizovaný pro rutinní workflow s jednotlivými částicemi a tomografií; a Titan Krios G4, vlajková loď 300 kV kryo-EM platforma navržená pro maximální stabilitu, automatizaci, propustnost a potenciál rozlišení.

Tyto platformy společně podporují screening kryo-mřížky, analýzu jednotlivých částic, kryoelektronovou tomografii a vývoj pokročilých metod v široké škále aplikací strukturální biologie.

Proč Longlight?

Nabízíme cenné a vyspělé zkušenosti s kryoelektronovou mikroskopií díky přístupu k špičkovým vědeckým výzkumným platformám a spolupráci s odborníky z oboru a akademickými vědeckými poradci. Naše služby kladou důraz na plnou transparentnost a úplnost doručení dat, pokrývající surová data, mezizpracovací soubory, konečné mapy hustoty, atomové modely a validační zprávy.

Kombinací pokročilých přístrojů, zkušených pracovních postupů zpracování dat a vyvážených termínů dodání poskytujeme spolehlivá, vysoce kvalitní kryo-EM strukturální řešení přizpůsobená různorodým výzkumným potřebám.

Často kladené otázky.

Otázka 1: Kolik vzorků musí zákazníci připravit?

Negativní mořidlo:

minimální koncentrace ~1 g/L

minimální objem ~100 μL.

SPA s rozpustnými bílkovinami:

minimální koncentrace ~1 g/L

minimální objem ~100μL.

SPA s membránovými proteiny:

minimální koncentrace ~1 g/L

minimální objem ~100μL.

bude diskutováno a případně upraveno

Otázka 2: Jaké jsou požadavky na vzorkový buffer?

pH rozmezí: 6,0–8,5
Koncentrace soli <200 mM
Nízký glycerol (kolik? DOI: 10,1107/S2053230X24002553)
Nízký azid (kolik? podpůrný odkaz chybí)

Otázka 3: Co je typický proces služby?

Konzultace projektu → podepsání NDA → potvrzení servisní smlouvy → přijetí vzorku → inspekci kvality → negativní skvrny → sběru dat → zpracování dat → doručení zpráv.

Otázka 4: Jaká je průměrná doba doručení?

Negativní barvení: 1-2 týdny.
SPA, předběžné výsledky: 6-8 týdnů.
SPA, model s vysokým rozlišením: 2-3 měsíce.

ChIP-seq

ChIP studuje interakci mezi DNA a proteiny a ChIP-seq je kombinován se sekvenováním nové generace k detekci míst DNA v genomu, která se vážou na specifické transkripční faktory/histony, což se používá ke studiu interakce mezi proteiny a chromatinem.

Genomika

Longlight se zaměřila na molekulární diagnostiku a molekulární biologii, uvedli jsme na trh některé nástroje a spotřební materiál související s NGS, zejména Focused Ultrasonicator, zavázali jsme se podporovat rozvoj genomiky, aby lépe sloužila lidské lékařské příčině.

Spotřební materiál a sady

Longlight poskytuje různé typy prefabrikovaného agarózového gelu, lapače nukleových kyselin, qubitové trubice, souprav pro extrakci nukleových kyselin a souprav pro přípravu knihovny. Mezitím mohou být všechny tyto produkty široce používány v základním vědeckém výzkumu, biofarmaceutikách a dalších aplikačních scénářích.